高效液相色譜法是一種快速有效的有機(jī)化合物分析技術(shù)，在分析測(cè)定有機(jī)化合物方面，以其快速、靈敏、選擇性好的特點(diǎn)，倍受分析工作者青睞，是環(huán)境監(jiān)測(cè)、衛(wèi)生防疫、石油化工、食品生產(chǎn)等行業(yè)作為水質(zhì)分析的標(biāo)準(zhǔn)儀器。

檢測(cè)器是高效液相色譜儀的重要組成部分，液相色譜檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)，常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。

1、紫外吸收檢測(cè)器

紫外吸收(UV)檢測(cè)器是目前HPLC應(yīng)用十分廣泛的檢測(cè)器。其工作原理是朗伯-比爾定律。這種檢測(cè)器靈敏度高，線性范圍寬，對(duì)流速和溫度變化不敏感，可用于梯度洗脫分離。紫外吸收檢測(cè)要求被檢測(cè)樣品組分有紫外-可見(jiàn)光吸收，而使用的流動(dòng)相無(wú)吸收，或在被測(cè)組分吸收波長(zhǎng)處無(wú)吸收。一般選擇在欲分析物有最大吸收的波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè)，以獲得最大靈敏度和抗干擾能力。在沒(méi)有最大吸收時(shí)，可采用末端吸收。檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇除取決于待測(cè)物質(zhì)的成分和分子結(jié)構(gòu)外，還必須考慮流動(dòng)相組成、共存組分干擾等因素。特別是各種溶劑都有一定的透過(guò)波長(zhǎng)下限值，超過(guò)這個(gè)波長(zhǎng)，溶劑的吸收會(huì)變得很強(qiáng)，以至于不能很好地測(cè)出待測(cè)物質(zhì)的吸收強(qiáng)度。下表列出了HPLC中一些常用的溶劑透過(guò)波長(zhǎng)的下限。

 

2、光電二極管陣列檢測(cè)器

光電二極管陣列檢測(cè)器（photodiode array detector，PDAD）又稱快速掃描紫外可見(jiàn)分光度計(jì)，是一種新型的光吸收檢測(cè)器。它采用光電二極管陣列作為檢測(cè)元件，形成多通道并行工作,同時(shí)它對(duì)光柵分離的所有波長(zhǎng)的光信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)，然后將其入射到陣列接收機(jī)，然后快速掃描二極管陣列來(lái)采集數(shù)據(jù),得到吸收值(A)是保留時(shí)間(tR)和波長(zhǎng)(L)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時(shí)觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù)，從而迅速?zèng)Q定具有*性和靈敏度的波長(zhǎng)。計(jì)算機(jī)化的數(shù)據(jù)處理，還可進(jìn)行色譜峰光譜相似性比較、峰純度檢測(cè)及利用譜圖庫(kù)對(duì)樣品進(jìn)行檢索等，為定性、定量分析提供更豐富的信息。

單光束二極管陣列檢測(cè)器，光源發(fā)出的光先通過(guò)檢測(cè)池，透射光由全息光柵色散成多色光，射到陣列元件上，使所有波長(zhǎng)的光在接收器上同時(shí)被檢測(cè)。陣列式接收器上的光信號(hào)用電子學(xué)的方法快速掃描提取出來(lái)，每幅圖像僅需要10 ms，超過(guò)色譜流出峰的速度，因此可隨峰掃描。

 

3、熒光檢測(cè)器

熒光檢測(cè)器（fluorescence detector， FD）是一種高靈敏度、有選擇性的檢測(cè)器，可檢測(cè)能產(chǎn)生熒光的化合物。熒光檢測(cè)器的原理與熒光分析法相同，化合物受紫外光激發(fā)后，發(fā)射出比激發(fā)光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光，稱為熒光或發(fā)射光。許多藥物和生命活性物質(zhì)具有天然熒光,能直接檢測(cè)，某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過(guò)化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，然后進(jìn)行熒光檢測(cè)。其最小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1 ng／mL，適用于痕量分析。一般情況下，熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外檢測(cè)器約高2個(gè)數(shù)量級(jí)，但其線性范圍不如紫外檢測(cè)器寬。近年來(lái)，采用激光作為熒光檢測(cè)器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器增強(qiáng)了熒光檢測(cè)的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。 

 

4、示差折光檢測(cè)器

示差折光檢測(cè)器（differential refractive Index detector， RID）是一種通用的濃度檢測(cè)器，對(duì)所有溶質(zhì)都有響應(yīng)。某些不能用選擇性檢測(cè)器檢測(cè)的組分，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等，可用示差檢測(cè)器檢測(cè)。示差檢測(cè)器是基于連續(xù)測(cè)定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來(lái)測(cè)定樣品含量的。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì)產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同，就可被檢測(cè)，二者相差愈大，靈敏度愈高。在一定濃度范圍內(nèi)檢測(cè)器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。

 

5、電化學(xué)檢測(cè)器

電化學(xué)檢測(cè)器（electrochemical detector， ECD）屬選擇性檢測(cè)器，主要有電導(dǎo)檢測(cè)器、安培檢測(cè)器、介電常數(shù)檢測(cè)器和電位測(cè)定檢測(cè)器等，可檢測(cè)具有電活性的化合物。電導(dǎo)、電位等檢測(cè)器已在離子色譜中得到了廣泛應(yīng)用；介電常數(shù)檢測(cè)器性能類似于示差折光檢測(cè)器；安培檢測(cè)器可檢測(cè)氧化性物質(zhì)，適用范圍很寬。

 

6、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器

化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器（Chemiluminescence detector， CD）是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種快速、靈敏的新型檢測(cè)器，具有設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來(lái)自化學(xué)反應(yīng)，故叫作化學(xué)發(fā)光。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來(lái)后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。

這種檢測(cè)器不需要光源，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào)，就可進(jìn)行檢測(cè)。這種檢測(cè)器的最小檢出量可達(dá)10～12g。 

 

7、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(evaporative light—scattering detector，ELSD)是20世紀(jì)90年代出現(xiàn)的新型通用型質(zhì)量檢測(cè)器，它適用于檢測(cè)揮發(fā)性低于流動(dòng)相的組分，主要用于檢測(cè)糖類、高級(jí)脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘油三酯及甾體等，并在沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)未知的情況下檢測(cè)未知化合物。對(duì)各物質(zhì)有幾乎相同的響應(yīng)，但是其靈敏度比較低，尤其是有紫外吸收的組分。此外流動(dòng)相必須是揮發(fā)性的，不能含有緩沖鹽等。它的通用檢測(cè)原理克服了常見(jiàn)于HPLC傳統(tǒng)檢測(cè)方法的不足，已越來(lái)越多地應(yīng)用于HPLC、超臨界色譜和逆流色譜中。不同于紫外和熒光檢測(cè)器，ELSD的響應(yīng)不依賴與樣品的光學(xué)特性，任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品均能被檢測(cè)，不受其官能團(tuán)的影響。靈敏度比示差折光檢測(cè)器高，對(duì)溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。